Como fazer uma curva padrão: Um Guia Passo-a-Passo

Como fazer uma curva padrão?
Curva Padrão. A curva-padrão corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância (A) e os de concentração. Com base na análise gráfica é possível verificar a linearidade da reação e calcular um fator de conversão de valores de absorbância em concentração.
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A curva padrão é uma ferramenta crucial para determinar a concentração de uma substância numa solução. É um gráfico que traça a concentração de uma substância conhecida (o padrão) contra a sua absorvância medida. Para criar uma curva padrão, é necessário utilizar um espectrofotómetro, um dispositivo que mede a quantidade de luz absorvida por uma amostra num comprimento de onda específico.

Calibração do espectrofotómetro Antes de poder criar uma curva padrão, é necessário calibrar o espectrofotómetro para garantir leituras precisas. Para o efeito, é necessário utilizar uma solução em branco, que é uma solução que não contém a substância que pretende medir. Siga estes passos para calibrar o espectrofotómetro:

1. Encher uma cuvete (um pequeno recipiente de vidro ou plástico) com a solução em branco.

2. Colocar a cuvete no espectrofotómetro e regular o comprimento de onda para o valor pretendido.

Premir o botão “zero” ou programar o espectrofotómetro para ler a absorvância zero.

Retirar a cuvete do espectrofotómetro e adicionar a substância que se pretende medir à solução em branco.

Cálculo da absorvância

Depois de calibrar o espectrofotómetro, pode começar a criar a curva-padrão. Comece por preparar uma série de soluções com concentrações conhecidas da substância que pretende medir. Por exemplo, se estiver a medir glicose, pode preparar soluções com concentrações de 0, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 e 1,0 mM.

Em seguida, medir a absorvância de cada solução com o espectrofotómetro no mesmo comprimento de onda utilizado durante a calibração. Registar os valores de absorvância numa tabela, juntamente com as concentrações correspondentes.

Por vezes, a substância que pretende medir pode ser difícil de separar das outras substâncias presentes na solução. Neste caso, pode ser necessário utilizar o método da adição padrão. Este método consiste em adicionar uma quantidade conhecida da substância à amostra e medir a absorvância. A curva de adição padrão é um gráfico que representa a quantidade de substância adicionada em função da alteração da absorvância.

Para criar a curva de adição de padrão, preparar uma série de soluções com quantidades crescentes da substância que se pretende medir. Adicionar cada solução à amostra e medir a absorvância. Traçar o gráfico da alteração da absorvância em função da quantidade de substância adicionada para criar a curva de adição de padrão.

Quantificação da glucose Uma vez criada a curva padrão ou a curva de adição padrão, pode utilizá-la para determinar a concentração da substância numa amostra desconhecida. Medir a absorvância da amostra com o espectrofotómetro e, em seguida, utilizar a curva padrão para encontrar a concentração correspondente. Por exemplo, se a absorvância da amostra corresponder a 0,5 mM na curva padrão, então a concentração da substância na amostra é de 0,5 mM.

Em conclusão, a criação de uma curva padrão é uma técnica essencial para determinar a concentração de uma substância numa solução. Seguindo os passos descritos neste guia, é possível criar uma curva padrão precisa e usá-la para quantificar a concentração da substância que está a estudar.

FAQ
Tendo isto em mente, qual é a função de uma curva padrão ao quantificar uma amostra utilizando o espectrofotómetro?

A função de uma curva padrão na quantificação de uma amostra utilizando o espectrofotómetro é estabelecer uma relação entre a concentração de uma substância conhecida e a absorvância da luz. Esta relação é então utilizada para determinar a concentração de uma amostra desconhecida, comparando a sua absorvância com a curva padrão. A curva padrão é criada medindo a absorvância de diferentes concentrações conhecidas da substância e traçando-as num gráfico.

Como preparar o reagente de Bradford?

Para preparar o reagente de Bradford, é necessário dissolver 100 mg de Coomassie Brilliant Blue G-250 em 50 ml de etanol a 95% e, em seguida, adicionar 100 ml de ácido fosfórico a 85%. Misturar bem a solução até a cor azul ficar uniforme. Em seguida, adicionar água destilada até obter um volume total de 1 litro e filtrar a solução através de papel de filtro. O reagente de Bradford pode ser armazenado à temperatura ambiente num frasco escuro até seis meses.

Você também pode perguntar como fazer curva de calibração no Origin?

Para fazer uma curva de calibração no Origin, pode seguir os seguintes passos:

1. Abrir o Origin e criar um novo projecto.

2. Introduza os seus dados numa folha de cálculo.

3. Realce os dados que pretende utilizar para a sua curva de calibração.

4. Clique no menu “Analysis” (Análise) e seleccione “Peak Analysis” (Análise de picos) e depois “Calibration Curve” (Curva de calibração).

Na caixa de diálogo “Calibration Curve”, seleccione o tipo de curva que pretende utilizar (linear, quadrática, cúbica, etc.) e clique em “OK”.

6. O Origin criará automaticamente uma curva de calibração com base nos seus dados. Pode personalizar a curva ajustando as opções de ajuste da curva ou adicionando barras de erro.

7. Quando estiver satisfeito com a sua curva de calibração, pode utilizá-la para analisar outros conjuntos de dados ou para fazer previsões com base nos seus dados.

Nota: Estas etapas são gerais e podem variar ligeiramente dependendo da versão do Origin que estiver a utilizar.